作者ivan1209 (根本科科)
看板Chemistry
标题[学习] HPLC tailing的问题
时间Thu Oct 6 04:54:21 2016
大家好，目前小弟在peptides合成的公司上班
今天遇到UPLC在主峰後面有类似tailing(or back shoulder)的问题，当然也有可能是back impurities
我之前大学专题跟研究所都是以研究有机合成为主
HPLC对我来说是完全新的东西目前慢慢在学
先假设这个情况是tailing来说
我的想法是利用ammonium acetate去过一下柱子之後在用95%水洗一下柱子之後再去跑samples
会这样想是因为我猜NH4+也许可以binding在Si-O-上可以减少tailing的问题
不晓得这样的观念是不是有错误??
主管他们是决定用pH小於12浓度的的NaOH是洗柱子
结果确实是解决tailing的问题
想请教一下用硷去洗柱子这样是甚麽想法为什麽可以解决tailing的问题?
(我们公司很常利用1%TFA and 1g/L NaOH去洗prep HPLC)
非常感谢指教
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※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc), 来自: 174.63.200.228
※ 文章网址: https://webptt.com/cn.aspx?n=bbs/Chemistry/M.1475700870.A.9D0.html
※ 编辑: ivan1209 (174.63.200.228), 10/06/2016 05:01:39
1F：推 ecstasy1: 硷对si有再生意思? 10/06 08:02
2F：→ sisay: 把Si-OX洗回原本的Si-OH吧 X是不要的离子 10/06 23:40
3F：→ sisay: silanol group 10/06 23:41
4F：→ ivan1209: 但是这样si-OH又会变Si-O-,之後又会出现tailing吧？ 10/07 01:36
5F：→ sisay: 那就要换endcapped column了 10/07 12:18
6F：→ ivan1209: 是喔......不知道主管他们怎想 谢谢你! 10/07 20:09
7F：→ ng0529: 你的移动相有用缓冲液吗? 10/16 21:53
8F：→ ng0529: 蛋白质胺基酸两性，你有用对pH? BUFFER盐类浓度? 10/16 21:55
不好意思我现在想不大起来当初的条件(我记得buffer蛮复杂的)
一般我们都是用0.1%TFA in water, 0.05M Ammonium acetate in water(pH调到9)
or TEA + phosphoric acid in water(pH调到2.0 or 2.6)
我提问的这个project不是用这三种.....
请问有甚麽书籍或是收寻关键字是与peptides的纯化有关系的吗?
※ 编辑: ivan1209 (174.63.200.228), 10/18/2016 04:46:16
9F：→ ng0529: 蛋白质 纯化 应该会连到很多，尤其某台大人的网页 10/18 16:22
10F：→ ng0529: 然後你需要了解 管柱特性，coating了什麽，耐酸硷到哪，适 10/18 16:23
11F：→ ng0529: 合什麽流洗保存 10/18 16:23
12F：→ ng0529: 还有添加试剂的意义，为何调pH，这有助你在HPLC的应用。 10/18 16:29
13F：→ ng0529: 因为你没提你的柱coating什麽，有时候硷洗只是还原本来的 10/18 16:35
14F：→ ng0529: 官能基状态，和除去旧有的沈积，当然拖尾就消失 10/18 16:35
15F：→ ivan1209: 好的谢谢!!我会再多看些文章的 10/22 02:10