作者pleomax1080 (God)
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标题[实验] 请问关於HPLC跑盐类跟清洗的问题
时间Fri Sep 13 12:34:35 2019
大家好
小弟我最近实验室要接手操作HPLC
用的移动相是磷酸buffer87%+ACN
管柱是C18
但跑出来的peak因为管柱老化开始严重拖尾而且与其它peak黏在一起(之前看学长跑的不
会)
主要是想问几个问题
爬了很多文 有的人说盐类跟ACN绝对不能碰在一起
但又有人说这种跑法很常见
结束後用高水相冲洗就可
所以不晓得到底适不适合这样做
因为目前的program是跑完15分钟後
会把ACN调到85%
最後会再调到100%冲提
如果会结晶的话是不是每跑一次就虐待管柱一次
目前旧的管柱已用半年
平衡时压力据说是刚换时的三倍(900升到2700psi)
我接手後已经搞了一个月
甲醇 水 ACN 各种浓度 流速 梯度去洗都试过了
最後还是逆洗 压力降到1800
但peak还是分不开
老师一直觉得是我们操作问题不愿意换管柱
主要还是想问前辈们如果换了新管柱
要怎麽保护避免他那麽快挂掉
谢谢
--
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1F：→ tony15899: 你用buffer跑的过程中ACN的比例过高时盐类就析出了 09/13 12:51
2F：→ tony15899: HPLC的条件在分析样品时"洗管柱"并非必要 09/13 12:52
3F：→ tony15899: 如果不影响分析只要在分析完样品再洗就好 09/13 12:53
4F：→ tony15899: 你的状况要洗管柱时还要先用高水相比有机溶剂先洗掉盐 09/13 12:54
5F：→ tony15899: 类 才能置换成纯有机相再洗 09/13 12:55
6F：→ tony15899: 当然那个高水相有机溶剂里的水是纯水 不是用Buffer那瓶 09/13 12:55
7F：→ tony15899: 还有你的pump里大概也有盐类累积，最好用温纯水不接 09/13 12:57
8F：→ tony15899: 管柱洗久一点，另外如果有保护管柱的话可以换新的试试 09/13 12:59
9F：→ pleomax1080: 先谢谢楼上的大大 会调高ACN去冲是因为在我们要的东 09/13 13:57
10F：→ pleomax1080: 西(15min)出来之後还会有其它物质(25min)左右 虽然 09/13 13:57
11F：→ pleomax1080: 我不确定是不是要用高有机才冲的出来 我自己没试过 09/13 13:57
12F：→ pleomax1080: 因为上次业务来看我们的program说建议我们把ACN浓 09/13 13:57
13F：→ pleomax1080: 度调高然後时间拉长 才冲的完全(本来学长只跑ACN85% 09/13 13:57
14F：→ pleomax1080: 2分钟) 所以我应该试试看不跑梯度 如果後面的peak 09/13 13:57
15F：→ pleomax1080: 还是有出来 就完全不用把ACN调高 一直用87% buffer 09/13 13:57
16F：→ pleomax1080: 去跑 等结束再用水洗+置换成有机相 是这个意思吗？ 09/13 13:57
18F：→ tony15899: 拉到85%ACN的溶解度都快变0了 09/13 15:48
19F：→ tony15899: 如果你的非高ACN条件能把杂质洗出来就延长时间 09/13 15:54
20F：→ tony15899: 洗不出来就直接打下一针看会不会影响 09/13 15:55
21F：→ pleomax1080: 了解！我再试试看 非常感谢 09/13 17:17
22F：→ toko6290: 才半年很短耶，我们洗法是高纯水和高ACN轮流冲洗，共50 09/13 22:15
23F：→ toko6290: 分钟。 09/13 22:15
24F：→ pleomax1080: 我也跟学长说半年挂掉算快 所以才想办法延长寿命 09/14 04:32
25F：→ pleomax1080: C18是不是不能纯水洗呢？ 09/14 04:33
26F：→ toko6290: C18是有机相，长期用纯水洗或跑会让它变形，大多会加10 09/14 11:07
27F：→ toko6290: 到20%ACN 09/14 11:07
28F：→ toko6290: 我前面的高纯水是指高浓度纯水，不是100%的 09/14 11:12