作者hhuurraayy (4funnnnn)
看板Chemistry
标题hplc问题
时间Fri May 27 03:51:48 2022
各位好～
最近在实验室收数据的时候产生一个hplc问题,现在很茫然，还请各位大神帮忙解惑，提供我
一些想法～拜托拜托
首先我原本条件都是ADH
但针对这化合物我打了300分钟，(ipa:hex= 15:85)图超过两百分钟出来，然後还杂到，我就
决定换管柱了
後来IA(ipa:hex = 30:70)
https://i.imgur.com/b9FjKDF.jpg
所以我又试了流速降到0.3 图如下
https://i.imgur.com/Vm5A228.jpg
後来降极性（ipa:hex=15:85)，变这样超级丑
https://i.imgur.com/wmy26YW.jpg
後来又跟学长讨论换溶剂系统，图怎麽跑都很丑（旁边单位是微伏特，所以其实peak很小）
（EtOH:hex=15:85)
https://i.imgur.com/7kuL1Tw.jpg
然後我又试了IB 跟IG 打一百分钟都没有东西（哭～）
想问问看有人可以给我一点建议吗～拜托拜托
先谢谢大家了，毕业也靠大家了
--
※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc), 来自: 220.136.213.181 (台湾)
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1F：推 kdjf: 你的化合物是什麽类型? 而且ADH和IA用的是类似的固定相，你 05/27 07:45
2F：→ kdjf: 用一样的溶剂系统自然会看到类似的结果啊 05/27 07:45
m
我用IA ADH IB IG 都试过换系统也试了，换系统讯号出不来，不知道为何= =
[1;31m→
tony15899: 我看不懂你要问什麽 是分离很差还是进样後没有peak 05/27 09:56
3F：→ tony15899: 而且你可以用梯度流洗 除非侦测器是RI 05/27 09:57
4F：→ tony15899: 而且最後一张图不算丑了 只是流洗强度有点太强 05/27 10:03
5F：→ tony15899: 还有时间超过1小时的条件你可以不用试了 05/27 10:04
6F：→ tony15899: 没特殊需求拉长分析时间只会拖累你实验时间 05/27 10:06
我就是因为时间拉太长我才换column但怎麽换都没有理想的结果，我用的HPLC设定方法只能设一种，不过梯度好像也是可行的方法我会再想办法试试看~感谢tony大建议，我换column就是因为讯号出不来，其他目前的大问题是讯号分不开，最後一张图讯号只有5mV，所以是超级小的~
※ 编辑: hhuurraayy (220.136.213.181 台湾), 05/27/2022 15:09:12
※ 编辑: hhuurraayy (220.136.213.181 台湾), 05/27/2022 15:21:11
7F：→ tony15899: 如果没讯号 把管柱拆掉换连接管去跑看有没有讯号出来 05/27 19:40
8F：→ tony15899: 假设进样正常的话侦测器讯号瞬间会出现一根 05/27 19:41
9F：→ tony15899: 如果还是没有讯号 1.你样品瓶锁太紧取样时变真空吸不到 05/27 19:42
10F：→ tony15899: 2. 检查自动进样或手动进样设备，或是检查样品配制浓度 05/27 19:44
11F：→ hhuurraayy: 就只有换IB有这个状况其他都没有~谢谢tony 大 05/27 22:36
12F：→ hhuurraayy: 我明天会用梯度看看 05/27 22:36
13F：推 encoreg10917: 有AD column 吗 05/28 07:46
没有哈哈
14F：推 blue010679: 设梯度看看 05/28 17:21
15F：推 blue010679: 表示你这两个东西在这个极性下贴很近 然後我记得想要p 05/28 17:27
16F：→ blue010679: eak比较不拖应该是要升流速 降流速峰宽变大更容易黏在 05/28 17:27
17F：→ blue010679: 一起 然後看起来他在EtOH系统状况不好 05/28 17:27
18F：→ blue010679: 还是维持原系统然後溶剂比例从固定改成配两瓶用混合拉 05/28 17:27
19F：→ blue010679: 梯度方式试看看 再去抓梯度条件 05/28 17:27
感谢建议，我昨天想说用IA 0.1硬冲，有分开了，但时间要两百分钟，流速一大概三十分钟就出来了，我得想法是先75/25十分钟，再换成70/30流速0.3，不知blue大觉得如何，我没试过梯度，所以也没什麽方向，想说先试试
※ 编辑: hhuurraayy (140.122.57.38 台湾), 05/29/2022 17:42:35
20F：→ tony15899: 如果管柱是 250 * 4.6 mm 5μm, 基本的流速就是1mL/min 05/29 23:20
21F：→ tony15899: 这个流速1一般是不会优先去变动的 都是动溶剂比例 05/29 23:24
22F：→ tony15899: 除非你用的溶剂会导致系统压力过高 例如纯IPA 05/29 23:27
23F：→ tony15899: 等梯度能在短时间出来大概就不用改梯度跑了 省去再平衡 05/29 23:28
24F：→ tony15899: 只是要注意每次打完样品要记得用适当强度溶剂洗管柱 05/29 23:30
好的，我会再试试~~感谢建议!!!!
25F：推 blue010679: 先看管柱的说明书建议流速 上面应该会有管柱尺寸的建 05/31 11:28
26F：→ blue010679: 议流速还有他的QC用的溶剂比例之类的 05/31 11:28
27F：→ blue010679: 然後RT时间 因为是正向所以比例可以拉高极性看看 能不 05/31 11:28
28F：→ blue010679: 能得到更好的peak集中性跟分离率 但还是要看整体压力 05/31 11:28
29F：→ blue010679: 不过要确定你的样品提高极性不会析出 如果会可能会塞 05/31 11:28
30F：→ blue010679: 管柱 05/31 11:28
31F：→ blue010679: 有原条件的图吗 这样才能比较原管柱跟改IAIA管柱的差 05/31 11:31
32F：→ blue010679: 异 不过如果你两只管柱的参数差不多 那他的分离效果差 05/31 11:31
33F：→ blue010679: 异不会太多 05/31 11:31
34F：推 blue010679: 你最後ipa 换成EtOH 等於整体极性上升 虽然讯号很小但 05/31 11:39
35F：→ blue010679: 看图确实分离率跟RT时间有改善 如果管柱耐受可以 换回 05/31 11:39
36F：→ blue010679: ADH 跟原本的移动相 然後把极性比例调高看看 不知道50 05/31 11:39
37F：→ blue010679: /50有没有办法就是了 05/31 11:39
管柱耐受度不高，所以我把流速调慢，後来再试一次EtOH对我的化合物太强了，流速0.1来是杂，但我会再试试其他方法~~谢谢B大!!!!
※ 编辑: hhuurraayy (220.136.187.131 台湾), 05/31/2022 15:21:58